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Como provar que bactérias transformadas estão expressando a proteína de interesse?
Se um plasmídeo contém as sequências de controle corretas, as bactérias poderiam ser induzidas a expressar o gene que contém quando um um sinal químico é adicionado. A expressão do gene leva à produção de RNAm, que é traduzido em proteína. As bactérias podem então ser lisadas (abertas) para liberar a proteína.
Como é possível saber se a colônia de bactéria possui o plasmídeo com o fragmento de DNA correto?
Em vez disso, devemos coletar o DNA de várias colonias e ver se cada uma contém o plasmídeo certo. Métodos como digestão por enzima de restrição e PCR/RCP são comumente usados para checar os plasmídeos.
Como isolar o gene de interesse?
Isolar o gene de interesse Para que se tenha o DNA recombinante, de duas origens diferentes, é necessário utilizar as enzimas de restrição. Essas enzimas reconhecem a sequência alvo específica e cortam seletivamente o fragmento que será utilizado.
Quais microrganismos podem ser utilizados para obtenção das proteínas ou enzimas de interesse?
Desse modo, as indústrias utilizam microrganismos que produzem enzimas de acordo com seu objetivo comercial. Sabe-se que bactérias incluindo actinomicetos e fungos têm esta capacidade, e devido aos interesses industriais, acabam sendo geneticamente modificados para produzirem maiores quantidades de enzimas.
Como processar a proteína obtida por meio biotecnológico?
Um método típico na biotecnologia aplicado na produção de proteínas recombinantes é a clonagem molecular, cujo princípio é montar moléculas de DNA recombinantes/quimérico, ou seja, uma molécula de DNA composta por fragmentos de informação genética de organismos (fontes) variados.
Qual é a enzima de replicação capaz de transformar RNAM EM DNA?
A principal enzima envolvida na transcrição é a RNA polimerase, que usa um modelo de DNA de fita simples, para sintetizar uma fita complementar de RNA.
Como ocorre o processo de clonagem molecular?
Num experimento convencional de clonagem molecular, o ADN que se vai clonar é obtido a partir dum organismo de interesse, depois é tratado com enzimas no tubo de ensaio para gerar fragmentos de ADN mais pequenos. Em seguida, estes fragmentos são combinados com um vetor de ADN para gerar moléculas de ADN recombinantes.